English
Materiály a metódy
3.1. Kultivácie v trepačkách
Prekultúry suspenzných buniek MDCK.SUS2 sa pestovali v Bunky sa kultivovali v chemicky definovanom médiu bez proteínov a živočíšnych zložiek, Smif8 (Smif8 PGD 2x, doplnené 5 mM glutamínom a 8 mM pyruvát), špecificky vyvinutý na kultiváciu suspenzných MDCK buniek [95]. (125 ml polykarbonátové Erlenmeyerove banky, #431143, Corning®, New York city, NY, USA) s pracovným objemom 50 ml (wv) , v inkubátore Multitron Pro (Infors HT, Bottmingen, Švajčiarsko) pri 37 °C a atmosfére 5 % CO2 s frekvenciou trepania 180 ot./min. Bunky sa pasážovali každé 3 až 4 dni s hustotou očkovania 0,5 až 0,8 × 106 buniek/ml. v adherentných MDCK bunkách (ECACC # 84121903). Zárodočný vírus mal titer 1,1 x 109 TCID50/ml.
Rastové a infekčné experimenty na overenie modelu sa uskutočňovali s použitím 500 ml trepacích baniek (#4113-0500, Nalgene™, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) s počiatočným kultivačným objemom 200 ml pri 150 ot./min. Uskutočnili sa dve kultivácie, jedna falošná infekcia (kultivácia 1), kde bunky rástli približne 200 hodín, a jedna infekcia (kultivácia 2), kde boli bunky infikované IAV približne 49 hodín po inokulácii. Na dosiahnutie synchrónnej infekcie bunkovej populácie sa použilo moi = 10. Kvôli relatívne nízkej koncentrácii buniek v čase infekcie (2,1 x 106 buniek/ml) a použitej vysokej moi nebolo potrebné ani nahradenie média, ani pridanie trypsínu (na aktiváciu vírusu). V oboch kultiváciách sa pred odberom vzoriek pridala sterilná voda Milli-Q, aby sa kompenzovalo odparovanie vody (1–2 ml/deň), keďže experiment sa uskutočnil v nehydratovanom inkubátore.
Zdroj:
https:/ /www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
Source from: https://www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.