Kako uporabljati bučke s celično kulturo za odkrivanje kolonij E. coli

Wed May 18 13:21:14 CST 2022

Koliformne bakterije se nanašajo na skupino gram-negativnih nebacilnih bakterij, ki lahko fermentirajo laktozo, proizvajajo kislino in plin, aerobno in fakultativno anaerobno. V praktičnih aplikacijah se pogosto uporablja kot indikator, ali je hrana kontaminirana z blatom. Med vsemi metodami zaznavanja je uporaba bučke za celično kulturo za odkrivanje najpogosteje uporabljena. Koraki delovanja so naslednji:

1. Vzorčenje in redčenje

(1) V skladu z aseptično metodo dajte 25 g (ali 25 ml) testnega vzorca v bučko celične kulture, ki vsebuje 225 ml sterilne vode (prednastavljeno ustrezno število steklenih kroglic v bučki) ali sterilizirano malto, in ga temeljito pretresite. Ali pa zmeljemo, da dobimo enotno razredčino 1:10. Najbolje je, da uporabite sterilni homogenizator za trdne vzorce in centrifugirajte pri hitrosti 800010000r/min 1 minuto, da naredite razredčitev 1:10.

(2) Uporabite 1 ml sterilno slamico za sesanje 1 ml razredčitve 1:10 vlijemo v epruveto z 9 ml sterilne vode, pretresemo in premešamo, da dobimo razredčino 1:100, zamenjamo z 1 ml sterilne slamice, pritisnemo. .

(3) Glede na zahteve glede higiene hrane ali oceno kontaminacije preskusnih vzorcev izberite tri razredčitve in za vsako razredčitev inokulirajte 3 epruvete. Lahko se inokulira tudi neposredno z vzorcem.

2. Začetni preskus fermentacije laktoze

To se običajno imenuje hipotetično testiranje. Njegov namen je preveriti, ali so v vzorcu bakterije, ki fermentirajo laktozo za proizvodnjo plina. Vzorec, ki ga je treba testirati, se inokulira v epruveto za fermentacijo žolčne soli laktoze, dvojna cev za fermentacijo žolčne soli laktoze se uporabi za inokulum nad 1 ml; enojna epruveta za fermentacijo žolčne soli laktoze se uporablja za 1 ml in manj kot 1 ml. Inokulirajte 3 epruvete za vsako razredčitev in jih postavite v inkubator pri 36±1℃ za 24±2h. Če vse epruvete za fermentacijo žolčne soli laktoze ne proizvajajo plina, se lahko poroča kot negativno na koliformne bakterije. Če nastaja plin, sledite spodnjemu postopku.

3. Ločevalna kultura

Fermentacijske epruvete, ki proizvajajo plin, so bile progaste in inokulirane na plošče z eozin metilen modrim agarjem ter gojene v inkubatorju pri 36±1°C 18-24 ur. Nato smo opazovali morfologijo kolonije in izvedli barvanje po Gramu, mikroskopski pregled in test ponovne fermentacije.

How to use cell culture flasks to detect E. coli colonies

4. Test dvojne fermentacije laktoze

Tako imenovani potrditveni test, katerega namen je dokazati, da gram-negativne nebacilne bakterije, izolirane iz epruvete, ki je bila pozitivna v začetnem testu fermentacije laktoze, lahko dejansko fermentirajo laktozo, da proizvedejo plin. Na zgoraj omenjenem selektivnem mediju EMB izberite 1 do 2 sumljivi koloniji koliformnih koliform za obarvanje po Gramu in hkrati inokulirajte epruvete za fermentacijo laktoze ter jih postavite v inkubator pri 36±l°C za 24±2 uri, da opazujete plin. proizvodnja. . Kadar epruveta za fermentacijo laktoze proizvaja plin in je obarvanje po gramu negativno, so bakterije brez Bacillus navedene kot pozitivne za koliformne bakterije; kjer epruveta za fermentacijo laktoze ne proizvaja plina ali je madež po gramu pozitiven, se poroča kot negativno za koliformne bakterije.

Zgornji je način delovanja z uporabo bučke za celične kulture za odkrivanje indikatorjev skupine E. coli. Escherichia coli je pomemben indikator, ki odraža, ali je hrana kontaminirana. Obvladovanje metode odkrivanja je osnovna veščina, ki jo mora imeti vsak inšpektor za živila.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.