Kako nadzorovati čas prebave tripsina v bučkah celične kulture

Wed May 18 13:20:18 CST 2022

Celična kultura vključuje celično inokulacijo, gojenje, nabiranje in druge postopke. Celice v bučke za celično kulturo so zrasle do določene mere in celice je treba pobrati. V tem času je treba celice na steni bučke prebaviti s tripsinom in nato pobrati. Med uporabo pankreatina je treba nadzorovati čas prebave.

Tripsin je heterogena proteaza, ki lahko razgradi beljakovine na celični membrani in v bučkah za celično kulturo. Z razgradnjo proteina na določenem mestu se protein na stičišču med proteini razgradi in celice zaradi napetosti svojega notranjega citoskeleta postanejo sferične, s čimer se celice ločijo. Stopnja prebave tripsina je ključni korak v celični kulturi: povečajo se pretirano prebavljeni celični ostanki, poveča se črna pena, celice bodo odpadle na koščke, kar resno vpliva na sposobnost preživetja celic, nekatere celice pa lebdijo in izgubijo z zavrženim tripsinom; prebava Nezadostna, celice je težko odpihniti s stene steklenice, večkratno pipetiranje bo poškodovalo tudi sposobnost preživetja celic.

How to control the digestion time of trypsin in the cell culture flasks

Različna tkiva ali celice različno reagirajo na delovanje pankreatina. Aktivnost dispergiranih celic pankreatina je povezana tudi z njegovo koncentracijo, temperaturo in časom delovanja. Ko je pH 8,0 in temperatura 37, je akcijska sposobnost raztopine pankreatina relativno močna. Pri uporabi pankreatina je treba nadzorovati koncentracijo, temperaturo in čas, da se izognemo poškodbam celic zaradi prekomerne prebave. Ker lahko Ca2+, Mg2+, serum in beljakovine zmanjšajo aktivnost pankreatina, je treba pri pripravi raztopine pankreatina, kot je raztopina D-Hanksa, uporabiti BSS brez Ca2+ in Mg2+. Ko končate prebavo, uporabite gojišče, ki vsebuje serum ali inhibitor tripsina, da ustavite učinek pankreatina na celice.

Poleg tega lahko, če gre za novo kupljeno celico, najprej uporabite nizko koncentracijo tripsina, da ugotovite prebavo čas in opazujte, ali so celice okrogle vsako minuto, in naredite zapis. Skratka, pri nabiranju celic v bučke za celično kulturo je treba nadzorovati čas prebave tripsina, da se ohrani sposobnost preživetja celic.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.