English
Bacteriile lizogenice se referă la bacteriile care au profagi integrati pe cromozomi și pot crește și se reproduc normal fără a fi lizate. Bacterofagii ușori au fost utilizați pe scară largă în domeniile transducției, vectorilor de inginerie genetică și biologiei moleculare. balon de cultură celulară poate fi folosit pentru a verifica lizogenitatea bacteriilor. Metoda de operare specifică este următoarea:
1. Cultura bacteriilor lizogenice: Se inoculează E. coli 225 (λ) activat de panta LB într-un balon de cultură celulară de 250 ml care conține 20 ml soluție de cultură LB, se cultivă cu agitare la 30°C timp de 16 ore și apoi se ia 2 ml suspensie bacteriană din acesta și conectați-l la altul Într-un balon Erlenmeyer de 250 ml care conține 20 ml bulion LB, cultură cu agitare la 37°C timp de 2 ore până la faza logaritmică.
2. Excluderea fagilor liberi: Dacă tulpina care trebuie testată este Bacil, aceasta poate fi transformată într-o suspensie de spori și apoi tratată la 80°C timp de 10 minute pentru a ucide fagul care poate fi adsorbit și liber pe suprafața bacteriilor lizogenice; dacă tulpina care urmează să fie testată este non-Bacillus, utilizați antiser preparat cu fagi sau soluție de citrat de sodiu 0,2% pentru a spăla celulele de lizogen în fază logică pentru a îndepărta fagul adsorbit la suprafață și cel liber. După centrifugare la 4000r/min timp de 10 minute, supernatantul poate fi adăugat cu bacterii indicator sensibile pentru determinarea plăcii cu două straturi, care este utilizată pentru a testa fagul liber al probei și fagul care adsorb bacteriile lizogenice. Fagul după centrifugare Celulele sunt induse.
3. Inducerea bacteriilor lizogenice: bacteriile colectate după centrifugare sunt spălate de două ori cu soluție salină normală sterilă și transformate într-o concentrație finală de 1011 celule/ml cu soluție salină normală sau 100 mmol/l tampon Tris-HCL (pH7,0) Pentru suspensia bacteriană, se adaugă 5 ml de suspensie bacteriană în fiecare vas, iradiați cu o lampă UV de 30 W la o distanță de 30 cm timp de 30 de secunde, adăugați imediat 5 ml de soluție de cultură LB cu dublă concentrație, amestecați bine și incubați la întuneric la 37°C timp de 2 ore.
4. Inspecția tulpinilor lizogenice: Se operează conform metodei cu agar cu dublu strat, se adaugă câteva picături de cloroform la lizatul indus de mai sus și se diluează corespunzător cu metoda de diluare de 10 ori. După selectarea celor trei diluții ale diluției, luați 0,3 ml pentru fiecare diluție. Se amestecă bine cu 0,2 ml suspensie de bacterii E. coli 226 sensibilă la faza logaritmică, apoi se adaugă mediu LB semi-corp care a fost topit și răcit la 45°C, se amestecă imediat și apoi se toarnă pe placa de mediu solid LB. După solidificare, 37 Incubați la ℃ timp de 6 ore și observați. Dacă pe placa de cultură apare un număr mare de plăci, se dovedește că tulpina testată este un lizogen.
Pentru a verifica dacă bacteriile au lizogenitate, urmați pașii de mai sus. Acordați atenție sterilității procesului în timpul funcționării pentru a evita operarea necorespunzătoare care afectează rezultatele testului.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.