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Bactérias lisogênicas referem-se a bactérias que possuem profagos integrados em seus cromossomos e podem crescer e se reproduzir normalmente sem serem lisadas. Os bacteriófagos leves têm sido amplamente utilizados nas áreas de transdução, vetores de engenharia genética e biologia molecular. O cell culture flask pode ser usado para verificar a lisogenicidade das bactérias. O método de operação específico é o seguinte:
1. Cultura de bactérias lisogênicas: Inocule E. coli 225 (λ) ativado pela inclinação LB em um frasco de cultura celular de 250 ml contendo 20 ml de solução de cultura LB, cultura com agitação a 30 ° C por 16 horas e, em seguida, retire 2 ml de suspensão bacteriana e conecte-o a outro Em um Erlenmeyer de 250ml contendo 20ml de caldo LB, cultura com agitação a 37°C por 2h até a fase logarítmica.
2. Excluir fago livre: Se a cepa a ser testada for Bacillus, ela pode ser transformada em uma suspensão de esporos e depois tratada a 80°C por 10 minutos para matar o fago que pode estar adsorvido e livre na superfície das bactérias lisogênicas; se a cepa a ser testada não for Bacillus, use anti-soro preparado por fago ou solução de citrato de sódio a 0,2% para lavar as células de lisogênio da fase logarítmica para remover os fagos adsorvidos na superfície e livres. Após centrifugação a 4000r/min por 10 minutos, o sobrenadante pode ser adicionado com bactérias indicadoras sensíveis para determinação de placa de dupla camada, que é usada para testar o fago livre da amostra e o fago que adsorve as bactérias lisogênicas. O fago após centrifugação As células são induzidas. Indução de bactérias lisogênicas: as bactérias coletadas após a centrifugação são lavadas duas vezes com solução salina normal estéril e transformadas em uma concentração final de 1011 células/ml com solução salina normal ou tampão Tris-HCL 100mmol/l (pH 7,0) Para suspensão bacteriana, adicionar 5ml de suspensão bacteriana em cada placa, irradiar com lâmpada UV de 30W a uma distância de 30cm por 30s, adicionar imediatamente 5ml de solução de cultura LB de dupla concentração, misturar bem e incubar no escuro a 37°C por 2h.
4. Inspeção de cepas lisogênicas: Operar de acordo com o método de ágar de camada dupla, adicionar algumas gotas de clorofórmio ao lisado induzido acima e diluir adequadamente com o método de diluição de 10 vezes. Após selecionar as três diluições da diluição, tome 0,3ml para cada diluição. Misture bem com 0,2 ml de suspensão de bactérias E. coli 226 sensível à fase logarítmica, em seguida, adicione meio de meio corpo LB que foi derretido e resfriado a 45 ° C, misture imediatamente e, em seguida, despeje-o na placa de meio sólido LB. Após a solidificação, 37 Incubar a ℃ por 6h e observar. Se um grande número de placas aparecer na placa de cultura, isso prova que a cepa testada é um lisogênio.
Para verificar se as bactérias têm lisogenicidade, siga os passos acima. Preste atenção à esterilidade do processo durante a operação para evitar uma operação inadequada que afete os resultados do teste.
To check whether the bacteria have lysogenicity, follow the above steps. Pay attention to the sterility of the process during operation to avoid improper operation that affects the test results.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.