Jak używać kolb do hodowli komórkowych do wykrywania kolonii E. coli?

Wed May 18 12:36:05 CST 2022

Bakterie z grupy coli odnoszą się do grupy Gram-ujemnych bakterii niebędących Bacillus, które mogą fermentować laktozę, wytwarzać kwas i gaz, tlenowe i fakultatywne beztlenowe. W zastosowaniach praktycznych jest często używany jako wskaźnik, czy żywność jest zanieczyszczona kałem. Spośród wszystkich metod wykrywania, najczęściej stosowanym jest użycie kolby do hodowli komórek do wykrywania. Etapy działania są następujące:

1. Pobieranie próbek i rozcieńczanie

(1) Zgodnie z metodą aseptyczną umieścić 25g (lub 25mL) badanej próbki w kolbie do hodowli komórkowej zawierającej 225mL sterylnej wody (ustawić odpowiednią liczbę szklanych kulek w kolbie) lub wysterylizowanym moździerzu, i dokładnie wstrząśnij. Lub zmiel, aby uzyskać jednolite rozcieńczenie 1:10. Najlepiej używać sterylnego homogenizatora do próbek stałych i wirować z prędkością 800010000 obr/min przez 1 min, aby uzyskać rozcieńczenie 1:10.

(2) Użyj sterylnej słomki o pojemności 1 ml zassać 1ml rozcieńczenia 1:10, wlać do probówki zawierającej 9ml sterylnej wody, wstrząsnąć i wymieszać do rozcieńczenia 1:100, wymienić na 1ml sterylnej słomki, nacisnąć. Powyższe operacje wykonuje się kolejno 10-krotnymi rozcieńczeniami seryjnymi .

(3) Zgodnie z wymogami higieny żywności lub oceną zanieczyszczenia badanych próbek, wybrać trzy rozcieńczenia i zaszczepić 3 probówki na każde rozcieńczenie. Można go również zaszczepić bezpośrednio próbką.

2. Test początkowej fermentacji laktozy

Jest to powszechnie określane jako test hipotetyczny. Jego celem jest sprawdzenie próbki pod kątem bakterii, które fermentują laktozę w celu wytworzenia gazu. Badaną próbkę zaszczepia się do probówki do fermentacji soli żółciowej z laktozą, probówkę do fermentacji z solą żółciową z podwójną laktozą stosuje się do inokulum powyżej 1 ml; pojedyncza rurka fermentacyjna z solą żółciową laktozy jest używana dla 1 ml i mniej niż 1 ml. Zaszczepić 3 probówki na każde rozcieńczenie i umieścić je w inkubatorze 36±1℃ na 24±2h. Jeśli wszystkie probówki fermentacyjne z laktozą i solą żółciową nie wytwarzają gazu, można to zgłosić jako negatywne dla bakterii z grupy coli. Jeśli wydobywa się gaz, postępuj zgodnie z poniższą procedurą.

3. Hodowla rozdzielająca Probówki fermentacyjne wytwarzające gaz posmarowano i zaszczepiono na płytkach agarowych z eozyną i błękitem metylenowym i hodowano w inkubatorze w 36±1°C przez 18-24 godziny. Następnie obserwowano morfologię kolonii i przeprowadzono barwienie metodą Grama, badanie mikroskopowe i test ponownej fermentacji.

4. Test podwójnej fermentacji laktozy

How to use cell culture flasks to detect E. coli colonies

Tak zwany test potwierdzający, którego celem jest wykazanie, że bakterie Gram-ujemne niebędące Bacillus wyizolowane z probówki, które były dodatnie w początkowym teście fermentacji laktozy, rzeczywiście mogą fermentować laktozę w celu wytworzenia gazu. Na wyżej wymienionym podłożu selektywnym do EMB wybierz od 1 do 2 podejrzanych kolonii coli do barwienia metodą Grama i jednocześnie zaszczep probówki do fermentacji laktozy i umieść je w inkubatorze o temperaturze 36±1°C na 24±2 godziny w celu obserwacji gazu produkcja. . Tam, gdzie rurka do fermentacji laktozy wytwarza gaz, a barwienie grama jest ujemne, bakterie wolne od Bacillus są zgłaszane jako dodatnie dla bakterii z grupy coli; tam, gdzie probówka do fermentacji laktozy nie wytwarza gazu lub barwienie grama jest dodatnie, jest zgłaszane jako ujemne dla bakterii z grupy coli.

Powyższą metodę operacyjną wykorzystuje

do wykrywania wskaźników grupy E. coli. Escherichia coli jest ważnym wskaźnikiem, który odzwierciedla, czy żywność jest zanieczyszczona. Opanowanie metody wykrywania jest podstawową umiejętnością, którą powinien posiadać każdy inspektor żywności.cell culture flaskskolby do hodowli komórkowych

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.