Cara menggunakan kelalang kultur sel untuk mengesan koloni E. coli

Wed May 18 16:34:16 CST 2022

Bakteria koliform merujuk kepada kumpulan bakteria bukan basil gram-negatif yang boleh menapai laktosa, menghasilkan asid dan gas, aerobik dan anaerobik fakultatif. Dalam aplikasi praktikal, ia sering digunakan sebagai penunjuk sama ada makanan tercemar oleh najis. Di antara semua kaedah pengesanan, penggunaan kelalang kultur sel untuk pengesanan adalah yang paling biasa digunakan. Langkah-langkah operasi adalah seperti berikut:

1. Pensampelan dan pencairan

(1) Mengikut kaedah aseptik, masukkan 25g (atau 25mL) sampel ujian dalam kelalang kultur sel yang mengandungi 225mL air steril (bilangan manik kaca yang sesuai dipraset dalam kelalang) atau mortar yang disterilkan, dan goncangkannya dengan teliti. Atau kisar untuk membuat pencairan seragam 1:10. Sebaik-baiknya gunakan homogenizer steril untuk sampel pepejal dan sentrifuge pada kelajuan 800010000r/min selama 1 min untuk membuat pencairan 1:10.

(2) Gunakan 1mL straw steril untuk menghisap 1Ml pencairan 1:10, tuangkan ke dalam tabung uji yang mengandungi 9mL air steril, goncang dan campurkan untuk membuat pencairan 1:100, gantikan dengan 1mL straw steril, tekan Operasi di atas dibuat berturut-turut 10 kali pencairan bersiri .

(3) Mengikut keperluan kebersihan makanan atau anggaran pencemaran sampel ujian, pilih tiga pencairan dan inokulasi 3 tiub untuk setiap pencairan. Ia juga boleh disuntik terus dengan sampel.

2. Ujian penapaian awal laktosa

Ini biasanya dirujuk sebagai ujian hipotesis. Tujuannya adalah untuk memeriksa sampel untuk bakteria yang menapai laktosa untuk menghasilkan gas. Sampel yang akan diuji disuntik ke dalam tiub penapaian garam hempedu laktosa, tiub penapaian garam hempedu laktosa berganda digunakan untuk inokulum melebihi 1 mL; tiub penapaian garam hempedu laktosa tunggal digunakan untuk 1 mL dan kurang daripada 1 mL. Inokulasi 3 tiub untuk setiap pencairan dan letakkannya dalam inkubator 36±1℃ selama 24±2j. Jika semua tiub penapaian garam hempedu laktosa tidak menghasilkan gas, ia boleh dilaporkan sebagai negatif untuk bakteria koliform. Jika terdapat gas yang mengeluarkan, maka Ikut prosedur di bawah.

3. Kultur pengasingan

Tiub penapaian yang menghasilkan gas telah dicoretkan dan diinokulasi pada plat agar-agar biru metilena eosin, dan dikultur dalam inkubator pada suhu 36±1°C selama 18-24 jam. Kemudian, morfologi koloni diperhatikan dan pewarnaan Gram, pemeriksaan mikroskopik dan ujian penapaian semula dilakukan.

How to use cell culture flasks to detect E. coli colonies

4. Ujian penapaian berganda laktosa

Apa yang dipanggil ujian pengesahan, yang tujuannya adalah untuk membuktikan bahawa bakteria bukan basil gram negatif yang diasingkan daripada tabung uji yang positif dalam ujian penapaian laktosa awal memang boleh menapai laktosa untuk menghasilkan gas. Pada medium EMB terpilih yang disebutkan di atas, pilih 1 hingga 2 koloni koliform yang mencurigakan untuk pewarnaan Gram, dan inokulasi tiub penapaian laktosa pada masa yang sama, dan letakkannya dalam inkubator 36±l°C selama 24±2 jam untuk memerhatikan gas pengeluaran. . Di mana tiub penapaian laktosa menghasilkan gas dan kesan gram adalah negatif, bakteria bebas Bacillus dilaporkan sebagai positif untuk koliform; di mana tiub penapaian laktosa tidak menghasilkan gas atau kesan gram positif, ia dilaporkan sebagai negatif untuk koliform.

Di ​​atas adalah kaedah operasi menggunakan kelalang kultur sel untuk mengesan penunjuk kumpulan E. coli. Escherichia coli adalah penunjuk penting yang mencerminkan sama ada makanan tercemar. Menguasai kaedah pengesanan adalah kemahiran asas yang perlu dimiliki oleh setiap pemeriksa makanan.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.