Лизоген бактерийн шинжилгээнд эсийн өсгөвөрлөх колбонд хэрэглэх

Wed May 18 15:56:09 CST 2022

Лизоген бактери гэдэг нь хромосом дээрээ профагуудыг нэгтгэсэн, задралгүйгээр хэвийн ургаж, үржих чадвартай бактерийг хэлдэг. Бага зэргийн бактериофагуудыг трансдукц, генийн инженерчлэлийн векторууд, молекул биологийн салбарт өргөнөөр ашиглаж ирсэн. эсийн өсгөвөрийн колбо-г нянгийн лизоген чанарыг шалгахад ашиглаж болно. Үйл ажиллагааны тусгай арга нь дараах байдалтай байна:

1. Лизоген бактерийн өсгөвөр: LB налуугаар идэвхжсэн E. coli 225 (λ)-ийг 20 мл LB өсгөвөрлөх уусмал агуулсан 250 мл эсийн өсгөвөрийн колбонд хийж, 30°С-т 16 цагийн турш сэгсэрч өсгөвөрлөж, түүнээс 2 мл бактерийн суспенз авч, 20мл LB шөл агуулсан 250мл-ийн багтаамжтай колбонд 37°С-т 2 цагийн турш логарифмын үе хүртэл өсгөвөрлөнө.

2. Чөлөөт фагийг оруулахгүй: Шинжилгээнд хамрагдах омог нь савханцар бол түүнийг спорын суспенз болгон хийж, дараа нь лизоген бактерийн гадаргуу дээр шингэж, чөлөөтэй байж болзошгүй фагийг устгахын тулд 80°С-т 10 минутын турш эмчилнэ; хэрэв шинжилгээнд хамрагдах омог нь нян биш бол фаг эсвэл 0.2% натрийн цитрат уусмалаар бэлтгэсэн антисерумыг ашиглан лог фазын лизоген эсийг угааж, гадаргууд шингэсэн болон чөлөөт фагуудыг зайлуулна. 4000р/мин-д 10 минутын турш центрифуг хийсний дараа дээд давхаргыг мэдрэмтгий индикатор бактерийн хамт нэмж давхар давхаргын хавтанг тодорхойлох боломжтой бөгөөд энэ нь дээжийн чөлөөт фаг болон лизоген бактерийг шингээх фагийг шалгахад хэрэглэгддэг. Центрифугийн дараах фаг Эсүүд өдөөгдөнө.

Application of cell culture flasks in the examination of lysogenic bacteria

3. Лизоген бактерийг өдөөх: Центрифуг хийсний дараа цуглуулсан бактерийг хоёр удаа ариутгасан хэвийн давсны уусмалаар угааж, хэвийн давсны уусмал эсвэл 100 ммоль/л Tris-HCL буфер (pH7.0) -аар эцсийн концентраци 1011 эс/мл болгоно. Бактерийн суспензийн хувьд нэмнэ. Таваг бүрт 5мл бактерийн суспенз хийж, 30Вт-ын хэт ягаан туяаны чийдэнгээр 30 см-ийн зайд 30 секундын турш гэрэлтүүлж, нэн даруй 5 мл давхар концентрацитай LB өсгөвөрлөх уусмал нэмж, сайтар хольж, 37 ° C-т харанхуй газар 2 цагийн турш өсгөвөрлөнө.

4. Лизогенийн омгийг шалгах: Давхар давхарга агарын аргын дагуу ажиллуулж, дээрх үүсгэсэн лизат дээр хэдэн дусал хлороформ нэмж, 10 дахин шингэлэх аргаар зохих ёсоор шингэлнэ. Шингэрэлтийн гурван шингэрүүлэлтийг сонгосны дараа шингэрүүлэлт бүрт 0.3 мл авна. 0.2 мл логарифмын фазын мэдрэмтгий E. coli 226 бактерийн суспензтэй сайтар хольж, дараа нь хайлж 45°С хүртэл хөргөсөн LB хагас биет тэжээлийг нэмээд даруй хольж, дараа нь LB хатуу дундын хавтан дээр хийнэ. Хатуу болсны дараа 37 хэмд 6 цагийн турш өсгөвөрлөж, ажиглана. Хэрэв өсгөвөрлөсөн хавтан дээр олон тооны товруу гарч ирвэл энэ нь туршиж үзсэн омог нь лизоген болохыг нотолж байна.

Бактери лизогентэй эсэхийг шалгахын тулд дээрх алхмуудыг дагана уу. Туршилтын үр дүнд нөлөөлөх буруу үйл ажиллагаанаас зайлсхийхийн тулд үйл ажиллагааны явцад үйл явцын ариутгалд анхаарлаа хандуулаарай.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.