English
Lizogeninės bakterijos reiškia bakterijas, kurių chromosomose yra integruoti profagai ir kurios gali normaliai augti ir daugintis nelizuojamos. Lengvi bakteriofagai buvo plačiai naudojami transdukcijos, genų inžinerijos vektorių ir molekulinės biologijos srityse. ląstelių kultūros kolba galima naudoti norint patikrinti bakterijų lizogeniškumą. Specifinis veikimo būdas yra toks:
1. Lizogeninių bakterijų kultūra: LB nuolydžiu aktyvuotą E. coli 225 (λ) pasėkite į 250 ml ląstelių kultūros kolbą, kurioje yra 20 ml LB kultūros tirpalo, kultūrą kratydami 30 °C temperatūroje 16 valandų, tada paimkite iš jos 2 ml bakterijų suspensijos ir sujunkite jį su kitu 250 ml Erlenmejerio kolboje, kurioje yra 20 ml LB sultinio, kultūrą kratykite 37 °C temperatūroje 2 valandas iki logaritminės fazės.
2. Išskirkite laisvą fagą: jei tiriama padermė yra Bacillus, iš jos galima pagaminti sporų suspensiją ir tada 10 minučių apdoroti 80°C temperatūroje, kad sunaikintų fagą, kuris gali būti adsorbuotas ir laisvas ant lizogeninių bakterijų paviršiaus; jei tiriama padermė yra ne Bacillus, naudokite antiserumą, paruoštą fagu arba 0,2 % natrio citrato tirpalu, kad išplautumėte logaritminės fazės lizogeno ląsteles, kad pašalintumėte paviršiuje adsorbuotą ir laisvą fagą. Po 10 minučių centrifugavimo 4000 r/min greičiu, supernatantą galima pridėti su jautriomis indikatorinėmis bakterijomis, kad būtų galima nustatyti dvisluoksnę plokštelę, kuri naudojama bandinio laisvam fagui ir lizogenines bakterijas adsorbuojančiam fagui ištirti. Fagas po centrifugavimo Ląstelės indukuojamos.
3. Lizogeninių bakterijų indukcija: po centrifugavimo surinktos bakterijos du kartus plaunamos steriliu normaliu fiziologiniu tirpalu ir galutinė koncentracija normaliu fiziologiniu tirpalu arba 100 mmol/l Tris-HCL buferiu (pH7,0) įpilama iki 1011 ląstelių/ml. Į kiekvieną lėkštelę po 5 ml bakterijų suspensijos, švitinti 30 W UV lempa 30 cm atstumu 30 s, nedelsiant įpilti 5 ml dvigubos koncentracijos LB kultūros tirpalo, gerai išmaišyti ir inkubuoti tamsoje 37 °C temperatūroje 2 valandas.
4. Lizogeninių padermių patikrinimas: veikia pagal dvigubo sluoksnio agaro metodą, į aukščiau pateiktą indukuotą lizatą įlašinkite kelis lašus chloroformo ir atitinkamai praskieskite 10 kartų praskiedimo metodu. Pasirinkę tris skiedimo skiedimus, kiekvienam skiedimui paimkite po 0,3 ml. Gerai sumaišykite su 0,2 ml logaritminei fazei jautrios E. coli 226 bakterijų suspensijos, tada įpilkite LB pusės kūno terpės, kuri buvo ištirpinta ir atvėsinta iki 45 °C, iš karto sumaišykite ir supilkite ant LB kietosios terpės plokštelės. Po sukietėjimo 37 Inkubuokite ℃ 6 valandas ir stebėkite. Jei kultivuotoje plokštelėje atsiranda daug apnašų, tai įrodo, kad tirtas štamas yra lizogenas.
Norėdami patikrinti, ar bakterijos turi lizogeniškumą, atlikite aukščiau nurodytus veiksmus. Eksploatacijos metu atkreipkite dėmesį į proceso sterilumą, kad išvengtumėte netinkamo veikimo, turinčio įtakos bandymo rezultatams.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.