English
Ląstelių lizė yra svarbus eksperimentinis būdas pakeisti ląstelių pralaidumą ir aktyvumą. Tai reiškia, kad po to, kai ląstelė yra užkrėsta virusu, virusas naudoja šeimininko ląstelės maistines medžiagas, kad susintetintų savo palikuonis, o tada viruso palikuonys sunaikina ląstelę-šeimininką ir paleidžiamas iš ląstelių. Ląstelių lizės eksperimentuose ląstelių kultūros kolbos yra įprastas vartojimo produktas. Ląstelių lizės veiksmai yra tokie:
1. Išpilkite auginimo terpę ir užsukite ląstelių kultūros buteliuką aukštyn kojom ant sugeriančio popieriaus, kad sugeriantis popierius sugertų auginimo terpę (arba kuriam laikui pastatykite buteliuką vertikaliai, kad likusi auginimo terpė nutekėtų į buteliuko dugną). o paskui pipete jį išsiurbkite ).
2. Į kiekvieną ląstelių buteliuką įpilkite 3 ml 4 ℃ iš anksto atšaldyto PBS (0,01 M pH 7,2～7,3). Padėkite ląsteles plokščiai ir švelniai purtykite 1 minutę, kad ląstelės išplautų, o tada išmeskite plovimo tirpalą. Pirmiau aprašytą veiksmą pakartokite du kartus, tris kartus plaudami ląsteles, kad nuplautumėte kultūros skystį. Išmeskite PBS ir padėkite kultivavimo kolbą ant ledo.
3. Įpilkite 10 ul PMSF (100 mM) į 1 ml lizės buferio, gerai suplakite ir padėkite ant ledo. (Prieš sumaišant su lizės tirpalu PMSF reikia sukratyti tol, kol neliks kristalų.)
4. Į kiekvieną ląstelių kolbą įpilkite 400 ul lizės buferio, kuriame yra PMSF, ir lizuokite ant ledo 30 minučių. Kad ląstelės visiškai lizuotų, kolbą reikia dažnai purtyti.
5. Po lizės švariu grandikliu nubraukite ląsteles vienoje kultivavimo kolbos pusėje (veiksmas turi būti greitas), o tada pistoletu perkelkite ląstelių liekanas ir lizatą į 1,5 ml centrifugos mėgintuvėlį. (Visa operacija kiek įmanoma turi būti atliekama ant ledo.)
6. Centrifuguokite 12000 aps./min., 4°C temperatūroje 5 min. (Iš anksto įjunkite centrifugą, kad atvėsintumėte)
7. Centrifuguotą supernatantą perkelkite į centrifugos mėgintuvėlį 0,5 min ir laikykite -20 °C temperatūroje.
Ląstelių kultūros kolbos naudojami ne tik ląstelių lizės eksperimentams, bet ir vidutinio dydžio ląstelių ir audinių kultūrai laboratorijoje, pavyzdžiui, Vero ląstelėse. , HEK 293 ląstelės, CAR-T ląstelės, CHO ląstelės, vabzdžių ląstelės ir kt.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.