Notkun á frumuræktarflöskum við rannsókn á lýsógengerlum

Wed May 18 14:47:10 CST 2022

Lysogenic bakteríur vísa til baktería sem hafa spádóma samþætta á litninga sína og geta vaxið og fjölgað sér eðlilega án þess að vera lýsuð. Vægir bakteríusýklar hafa verið mikið notaðir á sviði flutnings, erfðatækniferja og sameindalíffræði. Hægt er að nota frumuræktunarflaska til að athuga ljósmyndun baktería. Sértæka aðgerðaraðferðin er sem hér segir:

1. Ræktun lysogena baktería: Sáð E. coli 225 (λ) sem virkjast af LB-brekkunni í 250ml frumuræktarflösku sem inniheldur 20ml LB-ræktunarlausn, ræktað með hristingi við 30°C í 16 klukkustundir, og takið síðan 2ml bakteríusvif úr henni og tengdu það við annað Í 250ml Erlenmeyer flösku sem inniheldur 20ml af LB seyði, ræktað með hristingu við 37°C í 2 klst. í logaritmískan fasa.

2. Útiloka frjálsa fagur: Ef stofninn sem á að prófa er Bacillus, er hægt að gera hann í grósviflausn, og síðan meðhöndla hann við 80°C í 10 mínútur til að drepa fagur sem gæti verið aðsogast og laus á yfirborði lysogena bakteríanna; ef stofninn sem á að prófa er ekki Bacillus, Notaðu andsermi sem er búið til með fögum eða 0,2% natríumsítratlausn til að þvo logfasa lýsógenfrumur til að fjarlægja yfirborðsaðsogaða og frjálsa fögu. Eftir skilvindu við 4000r/mín í 10 mínútur er hægt að bæta við vökvanum með næmum vísisbakteríum til að ákvarða tvílaga plötu, sem er notað til að prófa frjálsa fagu sýnisins og fagu sem aðsogar lýsógenu bakteríurnar. Fagur eftir skilvindu Frumurnar eru framkallaðar.

Application of cell culture flasks in the examination of lysogenic bacteria

3. Framleiðslu ljósmyndandi baktería: bakteríurnar sem safnað er eftir skilvindu eru þvegnar tvisvar með dauðhreinsuðu venjulegu saltvatni og gerðar í lokastyrk upp á 1011 frumur/ml með venjulegu saltvatni eða 100 mmól/l Tris-HCL jafnalausn (pH7.0) Fyrir bakteríusvif, bætið við 5ml af bakteríusviflausn í hvern rétt, geislið með 30W UV lampa í 30cm fjarlægð í 30s, bætið strax 5ml af tvöföldum styrk LB ræktunarlausn, blandið vel saman og ræktið í myrkri við 37°C í 2klst.

4. Skoðun á lýsógenandi stofnum: Notið samkvæmt tveggja laga agaraðferðinni, bætið nokkrum dropum af klóróformi við ofangreint framkallað lýsat og þynnið á viðeigandi hátt með 10-falda þynningaraðferðinni. Eftir að hafa valið þrjár þynningar þynningarinnar skaltu taka 0,3 ml fyrir hverja þynningu. Blandið vel saman við 0,2ml af logaritmískum fasa-næmri E. coli 226 bakteríusviflausn, bætið síðan við LB hálfhluta miðli sem hefur verið brætt og kælt í 45°C, blandið strax og hellið því síðan á LB solid medium plötuna. Eftir storknun, 37 Ræktað við ℃ í 6 klst og athugað. Ef mikill fjöldi veggskjala kemur fram á ræktuðu plötunni, sannar það að stofninn sem prófaður er er lýsógen.

Til að athuga hvort bakteríurnar hafi ljósmyndun, fylgdu skrefunum hér að ofan. Gefðu gaum að ófrjósemi ferlisins meðan á notkun stendur til að forðast óviðeigandi notkun sem hefur áhrif á niðurstöður prófsins.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.