Verwendung von Zellkulturflaschen zum Nachweis von E. coli-Kolonien

Thu May 19 09:30:14 CST 2022

Coliforme Bakterien beziehen sich auf eine Gruppe von gramnegativen Nicht-Bazillus-Bakterien, die Laktose fermentieren, Säure und Gas produzieren können, aerob und fakultativ anaerob. In der Praxis wird es oft als Indikator dafür verwendet, ob Lebensmittel mit Fäkalien kontaminiert sind. Unter allen Erkennungsmethoden ist die Verwendung von Zellkulturflaschen zur Erkennung die am häufigsten verwendete. Die Arbeitsschritte sind wie folgt:

1. Probenahme und Verdünnung

(1) Geben Sie gemäß der aseptischen Methode 25 g (oder 25 ml) der Testprobe in eine Zellkulturflasche mit 225 ml sterilem Wasser (entsprechende Anzahl an Glasperlen in der Flasche voreinstellen) oder einen sterilisierten Mörser. und schütteln Sie es gründlich. Oder zu einer einheitlichen Verdünnung von 1:10 mahlen. Verwenden Sie am besten einen sterilen Homogenisator für feste Proben und zentrifugieren Sie bei einer Geschwindigkeit von 800010000 U/min für 1 Minute, um eine Verdünnung von 1:10 herzustellen.

(2) Verwenden Sie einen sterilen Strohhalm von 1 ml 1 ml einer 1:10-Verdünnung saugen, in ein Reagenzglas mit 9 ml sterilem Wasser gießen, schütteln und mischen, um eine 1:100-Verdünnung herzustellen, durch einen sterilen 1-ml-Strohhalm ersetzen, drücken .

(3) Wählen Sie entsprechend den lebensmittelhygienischen Anforderungen oder der Abschätzung der Kontamination der Untersuchungsproben drei Verdünnungen aus und inokulieren Sie 3 Röhrchen für jede Verdünnung. Es kann auch direkt mit der Probe inokuliert werden.

2. Anfänglicher Fermentationstest von Laktose

Dies wird allgemein als hypothetischer Test bezeichnet. Sein Zweck ist es, die Probe auf Bakterien zu untersuchen, die Laktose fermentieren, um Gas zu produzieren. Die zu testende Probe wird in das Lactose-Gallensalz-Fermentationsröhrchen inokuliert, das doppelte Lactose-Gallensalz-Fermentationsröhrchen wird für das Inokulum über 1 ml verwendet; Das einzelne Lactose-Gallensalz-Fermentationsröhrchen wird für 1 ml und weniger als 1 ml verwendet. Inokulieren Sie 3 Röhrchen für jede Verdünnung und stellen Sie sie für 24±2 Stunden in einen 36±1℃ Inkubator. Wenn alle Laktose-Gallensalz-Fermentationsröhrchen kein Gas produzieren, kann es als negativ für coliforme Bakterien gemeldet werden. Wenn Gas produziert wird, befolgen Sie das nachstehende Verfahren.

3. Trennkultur

Die gasproduzierenden Fermentationsröhrchen wurden ausgestrichen und auf Eosin-Methylenblau-Agarplatten inokuliert und in einem Inkubator bei 36 ± 1°C für 18–24 Stunden kultiviert. Dann wurde die Koloniemorphologie beobachtet und Gram-Färbung, mikroskopische Untersuchung und erneuter Fermentationstest wurden durchgeführt.

How to use cell culture flasks to detect E. coli colonies

4. Laktose-Doppelfermentationstest

Der sogenannte Bestätigungstest, dessen Zweck es ist zu beweisen, dass die gramnegativen Nicht-Bazillus-Bakterien, die aus dem im ersten Laktosefermentationstest positiven Reagenzglas isoliert wurden, tatsächlich Laktose fermentieren können, um Gas zu erzeugen. Auf dem oben erwähnten selektiven EMB-Medium 1 bis 2 verdächtige coliforme Kolonien für die Gram-Färbung auswählen und gleichzeitig Lactose-Fermentationsröhrchen inokulieren und sie 24 ± 2 Stunden lang in einen 36 ± 1 °C-Inkubator stellen, um das Gas zu beobachten Produktion. . Wenn das Lactose-Fermentationsröhrchen Gas produziert und die Gram-Färbung negativ ist, werden Bacillus-freie Bakterien als positiv für Coliforme gemeldet; Wenn das Laktose-Fermentationsröhrchen kein Gas produziert oder die Gram-Färbung positiv ist, wird sie als negativ für coliforme Bakterien gemeldet.

Oben ist die Betriebsmethode zur Verwendung von Zellkulturflaschen zum Nachweis von Indikatoren der E. coli-Gruppe. Escherichia coli ist ein wichtiger Indikator dafür, ob Lebensmittel kontaminiert sind. Die Beherrschung der Nachweismethode ist eine grundlegende Fähigkeit, die jeder Lebensmittelkontrolleur besitzen sollte.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.