লাইসোজেনিক ব্যাকটেরিয়া পরীক্ষায় সেল কালচার ফ্লাস্কের প্রয়োগ

লাইসোজেনিক ব্যাকটেরিয়া বলতে এমন ব্যাকটেরিয়াকে বোঝায় যেগুলির প্রোফেজগুলি তাদের ক্রোমোজোমে একত্রিত হয় এবং লাইজড না হয়েই স্বাভাবিকভাবে বৃদ্ধি ও পুনরুত্পাদন করতে পারে। ট্রান্সডাকশন, জেনেটিক ইঞ্জিনিয়ারিং ভেক্টর এবং আণবিক জীববিজ্ঞানের ক্ষেত্রে হালকা ব্যাকটেরিওফেজগুলি ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়েছে। সেল সংস্কৃতি ফ্লাস্ক ব্যাকটেরিয়ার লাইসোজেনিসিটি পরীক্ষা করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। নির্দিষ্ট অপারেশন পদ্ধতি নিম্নরূপ:

1. লাইসোজেনিক ব্যাকটেরিয়ার সংস্কৃতি: ইনোকুলেট ই. কোলাই 225 (λ) একটি 250ml সেল কালচার ফ্লাস্কে LB ঢাল দ্বারা সক্রিয় করুন যাতে 20ml LB কালচার সলিউশন থাকে, 30°C তাপমাত্রায় 16 ঘন্টার জন্য ঝাঁকুনি দিয়ে কালচার করুন এবং তারপর এটি থেকে 2ml ব্যাকটেরিয়াল সাসপেনশন নিন এবং এটিকে অন্যের সাথে সংযুক্ত করুন একটি 250ml Erlenmeyer ফ্লাস্কে যেখানে 20ml LB ব্রোথ রয়েছে, লগারিদমিক ফেজ থেকে 2 ঘন্টার জন্য 37°C তাপমাত্রায় কাঁপানো সহ সংস্কৃতি।

2। মুক্ত ফেজ বাদ দিন: যদি পরীক্ষা করা স্ট্রেনটি ব্যাসিলাস হয়, তবে এটি একটি স্পোর সাসপেনশন তৈরি করা যেতে পারে এবং তারপর লাইসোজেনিক ব্যাকটেরিয়া পৃষ্ঠে শোষিত এবং মুক্ত হতে পারে এমন ফেজটিকে মেরে ফেলার জন্য 80 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় 10 মিনিটের জন্য চিকিত্সা করা যেতে পারে; যদি পরীক্ষা করা স্ট্রেনটি নন-ব্যাসিলাস হয়, তাহলে পৃষ্ঠ-শোষিত এবং মুক্ত ফেজ অপসারণের জন্য লগ ফেজ লাইসোজেন কোষ ধোয়ার জন্য ফেজ দ্বারা প্রস্তুত অ্যান্টিসিরাম বা 0.2% সোডিয়াম সাইট্রেট দ্রবণ ব্যবহার করুন। 10 মিনিটের জন্য 4000r/মিনিট সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে, ডাবল-লেয়ার প্লেট নির্ধারণের জন্য সংবেদনশীল সূচক ব্যাকটেরিয়া দিয়ে সুপারনাট্যান্ট যোগ করা যেতে পারে, যা নমুনার মুক্ত ফেজ এবং লাইসোজেনিক ব্যাকটেরিয়া শোষণকারী ফেজ পরীক্ষা করতে ব্যবহৃত হয়। সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে ফেজ কোষগুলি প্ররোচিত হয়।

3. লাইসোজেনিক ব্যাকটেরিয়া আনয়ন: সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে সংগৃহীত ব্যাকটেরিয়াগুলিকে জীবাণুমুক্ত সাধারণ স্যালাইন দিয়ে দুবার ধুয়ে ফেলা হয় এবং 1011 কোষ/মিলি সাধারণ স্যালাইন বা 100mmol/l Tris-HCL বাফার (pH7.0) দিয়ে চূড়ান্ত ঘনত্বে তৈরি করা হয় ব্যাকটেরিয়াল সাসপেনশনের জন্য, যোগ করুন। প্রতিটি থালায় 5 মিলি ব্যাকটেরিয়া সাসপেনশন, 30 সেকেন্ডের জন্য 30 সেমি দূরত্বে একটি 30W UV বাতি দিয়ে আলোকিত করুন, অবিলম্বে 5ml ডাবল-ঘনত্ব LB কালচার সলিউশন যোগ করুন, ভালভাবে মিশ্রিত করুন এবং 2 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে অন্ধকারে সেঁকুন।

4. লাইসোজেনিক স্ট্রেনের পরিদর্শন: ডাবল-লেয়ার আগর পদ্ধতি অনুসারে কাজ করুন, উপরের প্ররোচিত লাইসেটে কয়েক ফোঁটা ক্লোরোফর্ম যোগ করুন এবং 10-গুণ তরলীকরণ পদ্ধতির সাথে যথাযথভাবে পাতলা করুন। পাতলা করার তিনটি তরল নির্বাচন করার পরে, প্রতিটি পাতলা জন্য 0.3 মিলি নিন। লগারিদমিক ফেজ সংবেদনশীল E. coli 226 ব্যাকটেরিয়া সাসপেনশনের 0.2ml সাথে ভালভাবে মেশান, তারপর LB হাফ-বডি মিডিয়াম যোগ করুন যা গলে গেছে এবং 45°C এ ঠান্ডা হয়েছে, অবিলম্বে মিশ্রিত করুন এবং তারপর LB সলিড মিডিয়াম প্লেটে ঢেলে দিন। দৃঢ়করণের পর, 37 6 ঘন্টার জন্য ℃ তে ইনকিউবেট করুন এবং পর্যবেক্ষণ করুন। যদি সংষ্কৃত প্লেটে প্রচুর সংখ্যক ফলক দেখা যায়, তবে এটি প্রমাণ করে যে পরীক্ষিত স্ট্রেনটি একটি লাইসোজেন।

ব্যাকটেরিয়াটির লাইসোজেনিসিটি আছে কিনা তা পরীক্ষা করতে, উপরের পদক্ষেপগুলি অনুসরণ করুন। পরীক্ষার ফলাফলকে প্রভাবিত করে এমন ভুল অপারেশন এড়াতে অপারেশন চলাকালীন প্রক্রিয়াটির বন্ধ্যাত্বের দিকে মনোযোগ দিন।

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.