Ứng dụng của đĩa nuôi cấy tế bào trong phát hiện MTT

Wed May 18 13:47:54 CST 2022

Đĩa nuôi cấy tế bào là một loại công cụ sinh học. Nó được chia thành đáy phẳng và đáy tròn tùy theo hình dạng. Số lượng giếng bao gồm 6 giếng, 12 giếng, 24 giếng, 48 ​​ giếng, 96 giếng, 384 giếng, ... Nó chủ yếu được sử dụng để nuôi cấy tế bào và cũng có thể được sử dụng để đo nồng độ protein, đĩa 96 giếng thường được sử dụng để phát hiện MTT.

Phương pháp MTT, còn được gọi là phương pháp so màu MTT , là một phương pháp phát hiện sự sống và tăng trưởng của tế bào. Nguyên tắc phát hiện là succinate dehydrogenase trong ty thể của tế bào sống có thể khử MTT ngoại sinh thành formazan tinh thể màu xanh tím không tan trong nước (Formazan) và lắng đọng trong tế bào, trong khi tế bào chết không có chức năng này. Dimethyl sulfoxide (DMSO) có thể hòa tan formazan trong tế bào và giá trị hấp thụ ánh sáng của nó được đo ở bước sóng 570nm bằng phương pháp xét nghiệm miễn dịch liên kết với enzyme, có thể phản ánh gián tiếp số lượng tế bào sống. Trong một phạm vi số tế bào nhất định, số lượng tinh thể MTT hình thành tỷ lệ thuận với số lượng tế bào. Các bước phát hiện như sau:

1. Nuôi cấy tế bào trong Đĩa nuôi cấy tế bào 96 giếng . Sau khi mật độ tế bào thích hợp, thêm 50ul MTT vào mỗi giếng và tiếp tục nuôi cấy trong 4 giờ;

2. Hút sạch môi trường nuôi cấy có chứa MTT và thêm 150ul DMSO. Rung theo chiều ngang trong 10 phút để các tinh thể hòa tan hoàn toàn. Đối với tế bào lơ lửng, sau khi ly tâm, hút đi   môi trường, sau đó thêm DMSO để hòa tan;

3. Đo độ hấp thụ ở bước sóng 550nm trên thiết bị xét nghiệm miễn dịch liên kết với enzym (đặt nhóm đối chứng hợp lý và nhóm trống);

4. Tỷ lệ sống sót của tế bào = giá trị độ hấp thụ của nhóm thực nghiệm / giá trị độ hấp thụ của nhóm đối chứng * 100%.

Cần lưu ý trong quá trình phẫu thuật rằng MTT là chất gây ung thư. Nếu có thể, hãy cố gắng đeo loại găng tay có màng trong suốt. MTT được chuẩn bị cần phải được vô trùng. MTT rất nhạy cảm với vi khuẩn. Sẽ không thành vấn đề nếu bạn thêm vào đĩa nuôi cấy tế bào 96 giếng mà không bảo vệ nó khỏi ánh sáng. Rốt cuộc, thời gian ngắn, hoặc bạn có thể tắt đèn trên bảng điều khiển.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.