MTT tespitinde hücre kültürü plakasının uygulanması

Thu May 19 08:56:29 CST 2022

Hücre kültürü plakasıbir tür biyolojik araçtır. Şekline göre düz tabanlı ve yuvarlak tabanlı olarak ikiye ayrılır. Kuyu sayısı 6 kuyu, 12 kuyu, 24 kuyu, 48 ​​kuyu, 96 kuyu, 384 kuyu vb. içerir. Esas olarak hücre kültürü için kullanılır ve ayrıca ölçmek için de kullanılabilir. protein konsantrasyonu, 96 oyuklu plakalar, MTT tespiti için yaygın olarak kullanılır. MTT kolorimetrik yöntem

olarak da bilinen MTT yöntemi, hücre hayatta kalmasını ve büyümesini saptamak için bir yöntemdir. Tespit prensibi, canlı hücrelerin mitokondrilerindeki süksinat dehidrojenazın, eksojen MTT'yi suda çözünmeyen mavi-mor kristal formazana (Formazan) indirgemesi ve onu hücrelerde biriktirmesi, ölü hücrelerin böyle bir işlevi olmamasıdır. Dimetil sülfoksit (DMSO), hücrelerde formazanı çözebilir ve ışık absorpsiyon değeri, canlı hücrelerin sayısını dolaylı olarak yansıtabilen enzim bağlantılı bir immünolojik test ile 570 nm'de ölçülür. Belirli bir hücre sayısı aralığında, MTT kristal oluşumunun miktarı hücre sayısıyla orantılıdır. Algılama adımları aşağıdaki gibidir:

1. Hücreleri bir MTT içeren kültür ortamını emdirin ve 150ul DMSO ekleyin. Kristalleri tamamen çözmek için yatay olarak 10 dakika titret. Askıya alınmış hücreler için, santrifüjlemeden sonra ortamı içinde kültürleyin. Hücre yoğunluğu uygun olduktan sonra, her bir oyuğa 50ul MTT ekleyin ve 4 saat boyunca kültüre devam edin; 96 oyuklu hücre kültürü plakası.

uzaklaştırın ve ardından çözünmesi için DMSO ekleyin; 3. Enzim bağlantılı immünolojik test cihazında 550 nm'de absorbansı ölçün (makul bir kontrol grubu ve boş grup ayarlayın);4. Hücre sağkalım oranı=deney grubunun absorbans değeri/kontrol grubunun absorbans değeri*%100.  Operasyon sırasında MTT'nin kanserojen olduğuna dikkat edilmelidir. Mümkünse şeffaf film eldivenleri giymeye çalışın. Hazırlanan MTT'nin steril olması gerekir. MTT bakterilere karşı çok hassastır. 96 kuyulu hücre kültürü plakasına ışıktan korumadan eklemeniz önemli değildir. , Sonuçta, zaman kısa veya konsoldaki aydınlatmayı kapatabilirsiniz.

3. Measure the absorbance at 550nm on the enzyme-linked immunoassay instrument (set a reasonable control group and blank group);

4. Cell survival rate=absorbance value of experimental group/absorbance value of control group*100%.

It should be noted during the operation that MTT is carcinogenic. If possible, try to wear the kind of transparent film gloves. The prepared MTT needs to be sterile. MTT is very sensitive to bacteria. It does not matter if you add to the 96-well cell culture plate without protecting it from light. , After all, the time is short, or you can turn off the lighting on the console.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.