English
Material och metoder
3.1. Shake Flask Cultivations
Förkulturer av MDCK.SUS2 suspensionsceller odlades i shaker flasks (125 ml polykarbonat Erlenmeyer-kolvar, #431143, Corning®, New York, NY, USA) med 50 ml arbetsvolym (wv) , i en Multitron Pro-inkubator (Infors HT, Bottmingen, Schweiz) vid 37 °C och 5 % CO2-atmosfär med en skakfrekvens på 180 rpm. Celler passerades var 3–4:e dag med en ympdensitet på 0,5–0,8 × 106 celler/ml.
IAV A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) frövirus användes för infektion, genererad i vidhäftande MDCK-celler (ECACC # 84121903). Fröviruset hade en titer på 1,1 × 109 TCID50/mL.
Celler odlades i ett kemiskt definierat, proteinfritt och animaliskt komponentfritt medium, Smif8 (Smif8 PGD 2×, kompletterat med 5 mM glutamin och 8 mM pyruvat), speciellt utvecklad för odling av suspensions-MDCK-celler [95].
Tillväxt- och infektionsexperiment för modellvalidering utfördes med 500 ml skakkolvar (#4113-0500, Nalgene™, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) med en initial odlingsvolym på 200 ml vid 150 rpm. Två odlingar utfördes, en skeninfektion (odling 1), där cellerna växte i cirka 200 timmar, och en infektion (odling 2), där celler infekterades med IAV cirka 49 timmar efter inokulering. För att uppnå en synkron infektion av cellpopulationen användes en moi = 10. På grund av den relativt låga cellkoncentrationen vid tidpunkten för infektion (2,1 × 106 celler/ml) och den höga moi som användes, var varken mediumersättning eller trypsintillsats (för virusaktivering) nödvändig. I båda odlingarna tillsattes sterilt Milli-Q-vatten före provtagningen för att kompensera för vattenavdunstning (1–2 mL/dag) eftersom experimentet utfördes i en icke-hydrerad inkubator.
Källa från: https:/ /www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.