Aplicarea plăcii de cultură celulară în detectarea MTT

Wed May 18 12:46:04 CST 2022

Placa de cultură celulară este un fel de instrument biologic. Se împarte în fund plat și fund rotund în funcție de formă. Numărul de godeuri include 6 godeuri, 12 godeuri, 24 godeuri, 48 ​​godeuri, 96 godeuri, 384 godeuri, etc. Este folosit în principal pentru cultura celulară și poate fi folosit și pentru măsurare concentrația de proteine, plăcile cu 96 de godeuri sunt utilizate în mod obișnuit pentru detectarea MTT.

Metoda MTT, cunoscută și ca metoda colorimetrică MTT, este o metodă pentru detectarea supraviețuirii și creșterii celulelor. Principiul de detectare este că succinatul dehidrogenaza din mitocondriile celulelor vii poate reduce MTT-ul exogen la formazan cristalin albastru-violet insolubil în apă (Formazan) și îl poate depozita în celule, în timp ce celulele moarte nu au o astfel de funcție. Dimetilsulfoxidul (DMSO) poate dizolva formazanul în celule, iar valoarea sa de absorbție a luminii este măsurată la 570 nm cu un imunotest legat de enzime, care poate reflecta indirect numărul de celule vii. Într-un anumit interval de numere de celule, cantitatea de formare de cristale MTT este proporțională cu numărul de celule. Pașii de detectare sunt următorii:

1. Culturați celulele într-un Placă de cultură celulară cu 96 de godeuri. După ce densitatea celulară este adecvată, adăugați 50 ul MTT în fiecare godeu și continuați cultivarea timp de 4 ore;

2. Aspirați mediul de cultură care conține MTT și adăugați 150ul de DMSO. Vibrați orizontal timp de 10 minute pentru a dizolva complet cristalele. Pentru celulele suspendate, după centrifugare, aspirați mediul și apoi adăugați DMSO pentru a se dizolva;

3. Măsurați absorbanța la 550 nm pe instrumentul de imunotest legat de enzime (setați un grup de control rezonabil și un grup martor);

4. Rata de supraviețuire celulară=valoarea absorbanței grupului experimental/valoarea absorbției grupului martor*100%.

De remarcat în timpul operației că MTT este cancerigen. Dacă este posibil, încercați să purtați genul de mănuși de film transparent. MTT-ul pregătit trebuie să fie steril. MTT este foarte sensibil la bacterii. Nu contează dacă adăugați la placa de cultură celulară cu 96 de godeuri fără a o proteja de lumină. , La urma urmei, timpul este scurt sau poți stinge iluminarea pe consolă.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.