Aplicação de placa de cultura celular na detecção de MTT

Thu May 19 09:42:04 CST 2022

The cell culture plateé uma espécie de ferramenta biológica. É dividido em fundo plano e fundo redondo de acordo com a forma. O número de poços inclui 6 poços, 12 poços, 24 poços, 48 ​​​​wells, 96 wells, 384 wells, etc. É usado principalmente para cultura de células e também pode ser usado para medir concentração de proteína, placas de 96 poços são comumente usadas para detecção de MTT.

MTT método, também conhecido como MTT colorimetric method, é um método para detectar a sobrevivência e o crescimento celular. O princípio de detecção é que a succinato desidrogenase nas mitocôndrias das células vivas pode reduzir o MTT exógeno a formazan de cristal azul-púrpura insolúvel em água (Formazan) e depositá-lo nas células, enquanto as células mortas não têm essa função. O dimetilsulfóxido (DMSO) pode dissolver o formazan nas células, e seu valor de absorção de luz é medido em 570 nm com um imunoensaio ligado a enzimas, que pode refletir indiretamente o número de células vivas. Dentro de um certo intervalo de números de células, a quantidade de formação de cristais de MTT é proporcional ao número de células. As etapas de detecção são as seguintes:

1. Culture as células em um placa de cultura de células de 96 poços. Depois que a densidade celular for apropriada, adicione 50 ul de MTT a cada poço e continue a cultura por 4 horas;

2. Sugue o meio de cultura contendo MTT e adicione 150ul de DMSO. Vibre horizontalmente por 10 minutos para dissolver completamente os cristais. Para células suspensas, após centrifugação, sugar o meio e, em seguida, adicionar DMSO para dissolver;

3. Meça a absorbância a 550 nm no instrumento de imunoensaio enzimático (defina um grupo de controle razoável e um grupo em branco);

4. Taxa de sobrevivência celular=valor de absorbância do grupo experimental/valor de absorbância do grupo controle*100%.

Deve-se notar durante a operação que o MTT é cancerígeno. Se possível, tente usar o tipo de luvas de filme transparente. O MTT preparado precisa ser estéril. O MTT é muito sensível às bactérias. Não importa se você adicionar à placa de cultura de células de 96 poços sem protegê-la da luz. , Afinal, o tempo é curto, ou você pode desligar a iluminação do console.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.