Detecção de atividade de células em fábricas de células - método MTT

Thu May 19 09:41:36 CST 2022

O cell factory é um consumível que é frequentemente usado para cultura de células aderentes. Durante o experimento, precisamos entender o estado de crescimento das células em tempo real e fazer ajustes relevantes de acordo com a situação específica. A viabilidade celular pode ser detectada pelo método MTT para determinar o crescimento celular.

O método MTT, também conhecido como método colorimétrico MTT, é um método para detectar a sobrevivência e o crescimento celular. O princípio de detecção é que a succinato desidrogenase nas mitocôndrias das células vivas pode reduzir o MTT exógeno a formazan cristalino azul-púrpura insolúvel em água e depositar nas células, enquanto as células mortas não têm essa função. O dimetilsulfóxido (DMSO) pode dissolver o formazan nas células, e seu valor de absorção de luz pode ser medido por ensaio imunossorvente ligado a enzima no comprimento de onda de 570 nm, que pode refletir indiretamente o número de células vivas. Dentro de um certo intervalo de número de células, a quantidade de formação de cristais de MTT é proporcional ao número de células. Este método tem sido amplamente utilizado na detecção de atividade de alguns fatores biologicamente ativos, triagem de drogas antitumorais em larga escala, teste de citotoxicidade e ensaio de radiossensibilidade tumoral. Caracteriza-se pela alta sensibilidade e economia.

Antes de testar a viabilidade das células na fábrica de células, um passo muito importante é a formulação do MTT. Normalmente, a concentração de MTT neste método é de 5 mg/ml. Portanto, 0,5 g de MTT pode ser pesado, dissolvido em 100 ml de solução salina tamponada com fosfato (PBS) ou meio sem vermelho de fenol, filtrado com filtro de 0,22 μm para remover bactérias da solução e armazenado a 4°C no escuro . . Durante a preparação e armazenamento, tente envolver o recipiente com papel alumínio.

Ao usar o método MTT para medir a atividade celular na fábrica de células, deve-se notar que o MTT é cancerígeno, portanto, tenha cuidado ao usá-lo. Este método só pode ser usado para detectar o número relativo de células e a viabilidade relativa, mas não o número absoluto de células. Ao testar os resultados com um leitor de microplacas, para garantir a linearidade dos resultados experimentais, a absorbância do MTT deve estar na faixa de 0-0,7 o máximo possível.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.