Zastosowanie płytki do hodowli komórkowych w detekcji MTT

Wed May 18 12:33:37 CST 2022

Płytka do hodowli komórkowejjest rodzajem narzędzia biologicznego. Jest podzielony na płaskie dno i okrągłe dno w zależności od kształtu. Liczba dołków obejmuje 6 dołków, 12 dołków, 24 dołki, 48 ​​Dołki, 96 dołków, 384 dołki, itd. Jest głównie używana do hodowli komórkowych i może być również używana do pomiaru stężenia białka, 96-studzienkowe płytki są powszechnie stosowane do wykrywania MTT.

Metoda MTT, znana również jako metoda kolorymetryczna MTT, jest metodą wykrywania przeżycia i wzrostu komórek. Zasada wykrywania polega na tym, że dehydrogenaza bursztynianowa w mitochondriach żywych komórek może redukować egzogenny MTT do nierozpuszczalnego w wodzie niebiesko-fioletowego krystalicznego formazanu (Formazanu) i odkładać go w komórkach, podczas gdy martwe komórki nie pełnią takiej funkcji. Dimetylosulfotlenek (DMSO) może rozpuszczać formazan w komórkach, a jego wartość absorpcji światła mierzy się przy długości fali 570 nm za pomocą enzymatycznego testu immunologicznego, który może pośrednio odzwierciedlać liczbę żywych komórek. W pewnym zakresie liczby komórek ilość formowanych kryształów MTT jest proporcjonalna do liczby komórek. Kroki wykrywania są następujące:

1. Wyhoduj komórki w 96-dołkowa płytka do hodowli komórkowej. Gdy gęstość komórek będzie odpowiednia, dodać 50 ul MTT do każdego dołka i kontynuować hodowlę przez 4 godziny;

2. Odessij pożywkę hodowlaną zawierającą MTT i dodaj 150ul DMSO. Wibruj poziomo przez 10 minut, aby całkowicie rozpuścić kryształy. W przypadku zawieszonych komórek, po odwirowaniu odssać pożywkę, a następnie dodać DMSO do rozpuszczenia;

3. Zmierzyć absorbancję przy 550 nm na enzymatycznym instrumencie do testów immunologicznych (ustawić rozsądną grupę kontrolną i grupę ślepą);

4. Wskaźnik przeżycia komórek = wartość absorbancji grupy doświadczalnej/wartość absorbancji grupy kontrolnej*100%.

Podczas operacji należy zauważyć, że MTT jest rakotwórczy. Jeśli to możliwe, spróbuj nosić przezroczyste rękawiczki foliowe. Przygotowany MTT musi być sterylny. MTT jest bardzo wrażliwy na bakterie. Nie ma znaczenia, czy dodasz do 96-dołkowej płytki do hodowli komórkowych bez ochrony przed światłem. , W końcu czas jest krótki, albo można wyłączyć oświetlenie na konsoli.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.