Ląstelių aktyvumo nustatymas ląstelių gamyklose – MTT metodas

Wed May 18 11:56:08 CST 2022

yra vartojimo reikmenys, dažnai naudojami prilipusių ląstelių kultūrai. Eksperimento metu turime suvokti ląstelių augimo būseną realiu laiku ir atlikti atitinkamus koregavimus pagal konkrečią situaciją. Ląstelių gyvybingumas gali būti aptiktas MTT metodu, siekiant nustatyti ląstelių augimą.MTT metodas, taip pat žinomas kaip MTT kolorimetrinis metodas, yra ląstelių išlikimo ir augimo nustatymo metodas. Aptikimo principas yra tas, kad sukcinato dehidrogenazė gyvų ląstelių mitochondrijose gali redukuoti egzogeninį MTT į vandenyje netirpią mėlynai violetinę kristalinę formazaną ir nusodinti ląstelėse, o negyvos ląstelės tokios funkcijos neturi. Dimetilsulfoksidas (DMSO) gali ištirpinti formazaną ląstelėse, o jo šviesos sugerties vertę galima išmatuoti naudojant fermentų imuninį tyrimą esant 570 nm bangos ilgiui, kuris gali netiesiogiai atspindėti gyvų ląstelių skaičių. Tam tikrame ląstelių skaičiaus diapazone MTT kristalų susidarymo kiekis yra proporcingas ląstelių skaičiui. Šis metodas buvo plačiai naudojamas kai kurių biologiškai aktyvių veiksnių aktyvumui nustatyti, didelio masto priešnavikinių vaistų atrankai, citotoksiškumo tyrimui ir naviko radiosensibilizavimo tyrimui. Jis pasižymi dideliu jautrumu ir ekonomiškumu.cell factory

Prieš bandant ląstelių gyvybingumą ląstelių gamykloje, labai svarbus žingsnis yra MTT formulavimas. Paprastai MTT koncentracija šiuo metodu yra 5 mg/ml. Todėl 0,5 g MTT galima pasverti, ištirpinti 100 ml fosfatinio buferinio fiziologinio tirpalo (PBS) arba terpėje be fenolio raudonumo, nufiltruoti 0,22 μm filtru, kad būtų pašalintos tirpale esančios bakterijos, ir laikyti 4 °C temperatūroje tamsoje. . . Paruošimo ir laikymo metu stenkitės indą apvynioti aliuminio folija.

Kai naudojate MTT metodą ląstelių aktyvumui matuoti ląstelių gamykloje, reikia atkreipti dėmesį, kad MTT yra kancerogeninis, todėl jį naudodami būkite atsargūs. Šis metodas gali būti naudojamas tik santykiniam ląstelių skaičiui ir santykiniam gyvybingumui nustatyti, bet ne absoliučiam ląstelių skaičiui. Bandant rezultatus mikroplokštelių skaitytuvu, siekiant užtikrinti eksperimento rezultatų tiesiškumą, MTT absorbcija turėtų būti kuo didesnė 0-0,7 ribose.

When using the MTT method to measure the cell activity in the cell factory, it should be noted that MTT is carcinogenic, so be careful when using it. This method can only be used to detect relative cell number and relative viability, but not absolute cell number. When testing the results with a microplate reader, in order to ensure the linearity of the experimental results, the MTT absorbance should be in the range of 0-0.7 as much as possible.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.