English
La lisi cellulare è un importante metodo sperimentale per modificare la permeabilità e l'attività delle cellule. Significa che dopo che una cellula è stata infettata da un virus, il virus utilizza i nutrienti nella cellula ospite per sintetizzare la propria progenie, e quindi la progenie del virus distrugge la cellula ospite e viene rilasciata dalle cellule. Negli esperimenti di lisi cellulare, flaconi per colture cellulari sono un materiale di consumo comune. I passaggi per la lisi cellulare sono i seguenti:
1. Versare il terreno di coltura e piegare il flacone di coltura cellulare capovolto su carta assorbente in modo che la carta assorbente assorba il terreno di coltura (oppure posizionare il flacone in posizione verticale per consentire al terreno di coltura residuo di fluire sul fondo del flacone e poi usa una pipetta per succhiarlo via ).
2. Aggiungere 3ml di PBS pre-raffreddato a 4℃ (0.01M pH7.2～7.3) a ciascun flacone di celle. Posare le cellule piatte e agitare delicatamente per 1 minuto per lavare le cellule, quindi scartare la soluzione di lavaggio. Ripetere l'operazione di cui sopra due volte, lavando le cellule tre volte per lavare via il liquido di coltura. Eliminare il PBS e posizionare la fiasca di coltura sul ghiaccio.
3. Aggiungere 10ul PMSF (100mM) a 1ml di tampone di lisi, agitare bene e mettere in ghiaccio. (Il PMSF deve essere agitato fino a quando non ci sono più cristalli prima della miscelazione con la soluzione di lisi.)
4. Aggiungere 400ul di tampone di lisi contenente PMSF a ciascun pallone di cellule e lisare in ghiaccio per 30 minuti. Per lisare completamente le cellule, la fiasca deve essere agitata frequentemente.
5. Dopo la lisi, utilizzare un raschietto pulito per raschiare le cellule su un lato del pallone di coltura (l'azione dovrebbe essere rapida), quindi utilizzare una pistola per spostare i detriti cellulari e il lisato in una provetta da centrifuga da 1,5 ml. (L'intera operazione dovrebbe essere eseguita il più possibile sul ghiaccio.)
6. Centrifugare a 12000 rpm a 4°C per 5 min. (Accendere la centrifuga in anticipo per il preraffreddamento)
7. Trasferire il surnatante centrifugato in una provetta da centrifuga per 0,5 minuti e conservarlo a -20°C.
Fiasche per colture cellulari non sono utilizzati solo per esperimenti di lisi cellulare, ma anche per colture cellulari e di tessuti su media scala in laboratorio, come le cellule Vero , cellule HEK 293, cellule CAR-T, cellule CHO, cellule di insetti, ecc.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.