English
Anyagok és módszerek
3.1. Shake Flask Cultivations
Az MDCK.SUS2 szuszpenziós sejtek előtenyészeteit shaker flasks-ban növesztettük (125 ml-es polikarbonát Erlenmeyer-lombikok, #431143, Corning®, New York City, NY, USA) 50 ml-es munkatérfogattal (wv) , Multitron Pro inkubátorban (Infors HT, Bottmingen, Svájc) 37 °C-on és 5% CO2 atmoszférában, 180 ford./perc rázási frekvenciával. A sejteket 3–4 naponként passzáltuk 0,5–0,8 × 106 sejt/ml oltási sűrűséggel.
IAV A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) oltóvírust használtunk a fertőzéshez, generáltunk. adherens MDCK sejtekben (ECACC # 84121903). Az oltóvírus titere 1,1 × 109 TCID50/ml volt. A sejteket kémiailag meghatározott, fehérje- és állati eredetű összetevőktől mentes táptalajban, Smif8-ban (Smif8 PGD 2×, kiegészítve 5 mM glutaminnal és 8) tenyésztettük. mM piruvát), amelyet kifejezetten szuszpenziós MDCK sejtek tenyésztésére fejlesztettek ki [95].
A modell validálására szolgáló növekedési és fertőzési kísérleteket 500 ml-es rázólombik (#4113-0500, Nalgene™, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) 200 ml kezdeti tenyésztési térfogattal 150 fordulat/perc mellett. Két tenyésztést végeztünk, egy álfertőzést (1. tenyésztés), ahol a sejtek körülbelül 200 órán keresztül nőttek, és egy fertőzést (2. tenyésztés), ahol a sejteket az inokuláció után körülbelül 49 órával fertőzték meg IAV-val. A sejtpopuláció szinkron fertőzésének eléréséhez moi = 10-et alkalmaztunk. A fertőzés idején viszonylag alacsony sejtkoncentráció (2,1 × 106 sejt/ml) és az alkalmazott magas moi miatt nem volt szükség sem tápközeg pótlására, sem tripszin hozzáadása (a vírus aktiválásához). Mindkét tenyésztéshez steril Milli-Q vizet adtunk a mintavétel előtt a víz párolgásának kompenzálására (1–2 ml/nap), mivel a kísérletet nem hidratált inkubátorban végeztük.
Forrás:
https:/ /www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htmhttps://www.mdpi.com/2218-1989/12/3/239/htm
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.