Sejttenyésztő lemez alkalmazása MTT detektálásban

Wed May 18 11:27:42 CST 2022

A sejttenyésztő lemezegyfajta biológiai eszköz. Formája szerint lapos és kerek aljúra osztható. A lyukak száma 6, 12 lyuk, 24 lyuk, 48 ​​lyuk, 96 lyuk, 384 lyuk stb. fehérjekoncentráció, 96 lyukú lemezeket gyakran használnak az MTT kimutatására.

MTT-módszer, más néven MTT-kolorimetriás módszer, a sejtek túlélésének és növekedésének kimutatására szolgáló módszer. A detektálási elv az, hogy az élő sejtek mitokondriumában lévő szukcinát-dehidrogenáz képes az exogén MTT-t vízben oldhatatlan kék-lila kristályformazánná (Formazan) redukálni és lerakni a sejtekben, míg az elhalt sejteknek nincs ilyen funkciója. A dimetil-szulfoxid (DMSO) képes feloldani a formazánt a sejtekben, fényelnyelési értékét 570 nm-en mérik egy enzimhez kötött immunoassay-vel, amely közvetve képes tükrözni az élő sejtek számát. A sejtszám egy bizonyos tartományán belül az MTT kristályképződés mértéke arányos a sejtek számával. Az észlelési lépések a következők:

1. Kultúrálja a sejteket egy 96-lyukú sejttenyésztő lemez-ban. Miután a sejtsűrűség megfelelő, adjon 50 ul MTT-t minden mérőhelyhez, és folytassa a tenyésztést 4 órán keresztül;

2. Szívja fel az MTT-t tartalmazó táptalajt, és adjon hozzá 150 ul DMSO-t. Vízszintesen vibráljon 10 percig, hogy a kristályok teljesen feloldódjanak. Szuszpendált sejtek esetében centrifugálás után szívja el  ​​a táptalajt, majd adjon hozzá DMSO-t, hogy feloldódjon;

3. Mérje meg az abszorbanciát 550 nm-en az enzimkapcsolt immunoassay eszközön (állítson be egy ésszerű kontrollcsoportot és üres csoportot);

4. Sejttúlélési arány=kísérleti csoport abszorbancia értéke/kontroll csoport abszorbancia értéke*100%.

A műtét során meg kell jegyezni, hogy az MTT karcinogén. Ha lehetséges, próbáljon meg átlátszó fóliás kesztyűt viselni. Az elkészített MTT-nek sterilnek kell lennie. Az MTT nagyon érzékeny a baktériumokra. Nem számít, ha a 96 lyukú sejttenyésztő lemezhez adjuk anélkül, hogy megvédnénk a fénytől. , Végül is rövid az idő, vagy lekapcsolhatod a világítást a konzolon.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.