Anwendung der Zellkulturplatte beim MTT-Nachweis

Thu May 19 09:26:58 CST 2022

Die Zellkulturplatteist eine Art biologisches Werkzeug. Es ist je nach Form in Flachboden und Rundboden unterteilt. Die Anzahl der Wells umfasst 6 Wells, 12 Wells, 24 Wells, 48 ​​​​Wells, 96 Wells, 384 Wells usw. Sie wird hauptsächlich für die Zellkultur verwendet und kann auch zum Messen verwendet werden Proteinkonzentration, 96-Well-Platten werden üblicherweise für den MTT-Nachweis verwendet.

MTT-Methode, auch bekannt als kolorimetrische MTT-Methode, ist eine Methode zum Nachweis von Zellüberleben und -wachstum. Das Nachweisprinzip besteht darin, dass die Succinat-Dehydrogenase in den Mitochondrien lebender Zellen das körperfremde MTT zu wasserunlöslichem blau-lila Kristall-Formazan (Formazan) reduzieren und in den Zellen ablagern kann, während tote Zellen keine solche Funktion haben. Dimethylsulfoxid (DMSO) kann Formazan in Zellen auflösen, und sein Lichtabsorptionswert wird bei 570 nm mit einem enzymgebundenen Immunoassay gemessen, der indirekt die Anzahl lebender Zellen widerspiegeln kann. Innerhalb eines bestimmten Zellzahlbereichs ist die Menge der MTT-Kristallbildung proportional zur Zellzahl. Die Erkennungsschritte sind wie folgt:

1. Kultivieren Sie die Zellen in einem Zellkulturplatte mit 96 Vertiefungen. Nachdem die Zelldichte angemessen ist, 50 ul MTT in jede Vertiefung geben und 4 Stunden lang weiter kultivieren;

2. Saugen Sie das MTT enthaltende Kulturmedium ab und fügen Sie 150 ul DMSO hinzu. 10 Minuten lang horizontal vibrieren, um die Kristalle vollständig aufzulösen. Bei suspendierten Zellen nach dem Zentrifugieren das Medium absaugen  und dann zum Auflösen DMSO hinzufügen;

3. Messen Sie die Extinktion bei 550 nm auf dem enzymgebundenen Immunoassay-Instrument (stellen Sie eine angemessene Kontrollgruppe und eine Blindgruppe ein);

4. Zellüberlebensrate = Extinktionswert der Versuchsgruppe/Extinktionswert der Kontrollgruppe*100 %.

Bei der Operation ist zu beachten, dass MTT krebserregend ist. Versuchen Sie, wenn möglich, eine Art transparente Filmhandschuhe zu tragen. Das vorbereitete MTT muss steril sein. MTT ist sehr empfindlich gegenüber Bakterien. Es spielt keine Rolle, ob Sie die 96-Well-Zellkulturplatte hinzufügen, ohne sie vor Licht zu schützen. Immerhin ist die Zeit knapp, oder Sie können die Beleuchtung an der Konsole ausschalten.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.