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Ampolle per colture cellularisono strumenti comunemente usati per la coltura cellulare aderente e le operazioni di sottocoltura cellulare sono coinvolte nella coltura delle cellule. Come dovremmo far passare le cellule aderenti? Puoi seguire questi passaggi:
1. Estrarre la soluzione di coltura preriscaldata: estrarre la soluzione di coltura preriscaldata, pulirla con un batuffolo di cotone imbevuto di alcol prima di metterla nel banco ultra-pulito.
2. Estrarre le cellule dall'incubatore: prestare attenzione a stringere il tappo del flacone quando si estraggono le cellule dal flacone di coltura cellulare, pulire il tavolo del microscopio con batuffoli di cotone imbevuti di alcol e quindi osservare le cellule al microscopio.
3. Metti la bottiglia di coltura nel banco da lavoro ultra pulito e apri la bocca della bottiglia, e allo stesso tempo brucia la bocca sulla lampada ad alcool per la disinfezione.
4. Aggiungere la soluzione digestiva: aspirare con cura la vecchia soluzione di coltura, lavare (risciacquare) con PBS, aggiungere una quantità adeguata di soluzione digestiva (soluzione di tripsina), prestare attenzione alla quantità di soluzione digestiva per coprire le cellule e la temperatura di digestione è di 37° C.
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5. Osservare le cellule al microscopio: osservare le cellule digerite al microscopio invertito. Se il citoplasma è retratto e le cellule non sono più collegate in fogli, ciò indica che le cellule sono correttamente digerite in questo momento.
6. Eliminare la soluzione di tripsina e aggiungere terreno di coltura fresco per terminare la reazione. Pipettare con cautela nella sospensione cellulare.
7. Pipettare la sospensione cellulare in una provetta da centrifuga da 10 ml. Dopo l'equilibratura, posizionare la provetta da centrifuga in una centrifuga e centrifugare a 1000 rpm/min per 5 min.
8. Eliminare il surnatante, aggiungere un volume appropriato di terreno di coltura e soffiare delicatamente le cellule con un contagocce per ottenere una sospensione cellulare.
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9. Aspirare e distribuire la sospensione cellulare in 2 - 3 fiasche di coltura, aggiungere la quantità appropriata di terreno di coltura e serrare i tappi.
10. Osservazione delle cellule al microscopio: osservare la quantità di cellule al microscopio invertito e contare se necessario. Si noti che una densità troppo bassa influirà sulla crescita delle cellule attraversate e la densità delle cellule attraversate non dovrebbe essere inferiore a 5×105/ml. Infine, fai un segno.
11. Continuare la coltura: pulire il flacone di coltura con un batuffolo di cotone imbevuto di alcol, allentare correttamente il tappo e metterlo in un incubatore a CO2 per continuare la coltura. Le cellule hanno iniziato ad attaccarsi alla parete del pallone 2 - 4 ore dopo il passaggio.
Il passaggio delle cellule nel pallone di coltura cellulare comporta la digestione delle cellule. Dovremmo prestare attenzione al controllo del tempo di digestione per evitare danni alle cellule a causa di una digestione eccessiva.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.