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La contaminazione da micoplasma è un problema molto comune quando si coltivano cellule in cell factory. A differenza di altre contaminazioni, le cellule contaminate da micoplasma generalmente non diventano torbide, quindi è difficile giudicare ad occhio nudo. Ci sono quattro modi per determinare se le cellule sono contaminate da micoplasma:
1. Colorazione con fluorescenza del DNA
Il metodo di colorazione con fluorescenza del DNA si basa sul principio che il colorante fluorescente Hoechst33258 può legarsi alla regione ricca di basi AT nel DNA del micoplasma. I punti fluorescenti sono DNA di micoplasma ricco di regioni di base AT.
2. Tecnologia PCR
Si disegnano i primer specifici in base alle sequenze conservate nel genoma del Mycoplasma, si amplifica l'acido nucleico del campione da testare e si effettua la diagnosi analizzando la dimensione del prodotto amplificato. La tecnologia di rilevamento PCR viene utilizzata per il rilevamento della contaminazione da micoplasma, con ciclo breve, alta sensibilità, buona specificità, funzionamento semplice e può rilevare un gran numero di campioni contemporaneamente.
3. Il test dell'immunosorbente legato all'enzima (ELISA)
ELISA viene utilizzato nella rilevazione della contaminazione da micoplasma, con buona specificità e sensibilità, e può completare la rilevazione di un gran numero di campioni contemporaneamente. Ha le caratteristiche di un rilevamento qualitativo semplice, rapido e quantitativo.
4. Microscopio elettronico
In genere, le cellule nelle fabbriche di cellule vengono coltivate per 48-72 ore. Prima che le cellule siano quasi confluenti, le cellule vengono digerite con tripsina per creare una sospensione cellulare, fissata, incorporata e affettata prima dell'osservazione.
I suddetti sono quattro metodi di rilevamento comunemente usati per rilevare la contaminazione da micoplasma nelle fabbriche di cellule. Al momento, ci sono più di 20 tipi di micoplasma noti per contaminare le cellule, di cui oltre il 95% sono micoplasmi orali, quindi gli operatori dovrebbero prestare attenzione al funzionamento asettico durante la coltura delle cellule.
The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.
The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.
In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.
Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.
NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.
In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.