Aplicación de placa de cultivo celular en detección de MTT

Thu May 19 09:56:19 CST 2022

La placa de cultivo celulares una especie de herramienta biológica. Se divide en fondo plano y fondo redondo según la forma. El número de pocillos incluye 6 pocillos, 12 pocillos, 24 pocillos, 48 ​​​​pocillos, 96 pocillos, 384 pocillos, etc. Se utiliza principalmente para el cultivo celular y también se puede utilizar para medir concentración de proteína, las placas de 96 pocillos se utilizan comúnmente para la detección de MTT.

El método MTT, también conocido como método colorimétrico MTT, es un método para detectar la supervivencia y el crecimiento celular. El principio de detección es que la succinato deshidrogenasa en la mitocondria de las células vivas puede reducir el MTT exógeno a formazán de cristal azul-púrpura insoluble en agua (Formazan) y depositarlo en las células, mientras que las células muertas no tienen tal función. El dimetilsulfóxido (DMSO) puede disolver el formazán en las células y su valor de absorción de luz se mide a 570 nm con un inmunoensayo ligado a enzimas, que puede reflejar indirectamente el número de células vivas. Dentro de un cierto rango de números de células, la cantidad de formación de cristales de MTT es proporcional al número de células. Los pasos de detección son los siguientes:

1. Cultive las células en un placa de cultivo celular de 96 pocillos. Después de que la densidad celular sea la adecuada, agregue 50 ul de MTT a cada pocillo y continúe cultivando durante 4 horas;

2. Succione el medio de cultivo que contiene MTT y agregue 150 ul de DMSO. Vibre horizontalmente durante 10 minutos para disolver completamente los cristales. Para las células suspendidas, después de la centrifugación, succione el medio y luego agregue DMSO para disolverlo;

3. Mida la absorbancia a 550 nm en el instrumento de inmunoensayo ligado a enzimas (establezca un grupo de control y un grupo en blanco razonables);

4. Tasa de supervivencia celular=valor de absorbancia del grupo experimental/valor de absorbancia del grupo de control*100%.

Debe tenerse en cuenta durante la operación que el MTT es cancerígeno. Si es posible, intente usar el tipo de guantes de película transparente. El MTT preparado debe ser estéril. El MTT es muy sensible a las bacterias. No importa si se añade a la placa de cultivo celular de 96 pocillos sin protegerla de la luz. , Después de todo, el tiempo es corto, o puede apagar la iluminación de la consola.

The FAI climbed 5.9 percent year-on-year in the first 11 months of 2018, quickening from the 5.7-percent growth in Jan-Oct, the National Bureau of Statistics (NBS) said Friday in an online statement.

The key indicator of investment, dubbed a major growth driver, hit the bottom in August and has since started to rebound steadily.

In the face of emerging economic challenges home and abroad, China has stepped up efforts to stabilize investment, in particular rolling out measures to motivate private investors and channel funds into infrastructure.

Friday's data showed private investment, accounting for more than 60 percent of the total FAI, expanded by a brisk 8.7 percent.

NBS spokesperson Mao Shengyong said funds into weak economic links registered rapid increases as investment in environmental protection and agriculture jumped 42 percent and 12.5 percent respectively, much faster than the average.

In breakdown, investment in high-tech and equipment manufacturing remained vigorous with 16.1-percent and 11.6-percent increases respectively in the first 11 months. Infrastructure investment gained 3.7 percent, staying flat. Investment in property development rose 9.7 percent, also unchanged.